摘要: 针对水中病原微生物的污染，选择大肠埃希氏菌E.coli作为病原示踪剂，以E.coli染色体上β-葡萄糖醛酸酶uid a目的基因建立了SYBR Green实时荧光定量PCR的检测方法。该定量PCR方法灵敏度高，检测限可达104CFU/L，线性关系良好，相关系数为R2=0.999。研究表明，定量PCR与菌液浓度呈显著正相关R2=0.935。通过人工投加腐殖酸、COD，研究了水中抑制物对定量PCR和膜过滤MF培养法的影响。结果显示，腐殖酸可使E.coli在培养皿上的菌落变小聚集，且显色不明显，当腐殖酸量为20 mg/L时，浓度为50 CFU/100 m L的E.coli完全受到抑制，没有菌落出现。腐殖酸对PCR扩增的抑制作用明显，当腐殖酸浓度增加到10 mg/L，定量PCR检测结果基因拷贝数减少约1 log，增加到20 mg/L定性PCR检测结果为阴性。
关键词: E.coli；实时荧光定量PCR；膜过滤；腐殖酸；抑制作用
