腐植酸专利

一种高效提取厌氧颗粒污泥微生物总RNA的方法

发明(设计)人:姬丹丹;臧立华;薛嵘;李肖玲
申请(专利权)人:齐鲁工业大学
公开(公告)号:CN103695414B   公开(公告)日:2016-06-08 00:00:00   法律状态:有效

摘要:本发明属于环境分子生物学技术领域,涉及一种高效提取厌氧颗粒污泥微生物总RNA的方法,取活性污泥离心,弃上清,然后向离心管内加入灭菌玻璃珠和贮存液Ⅰ,将离心管管盖拧紧后置于旋涡混合器击打,离心弃上清,磷酸盐缓冲液洗涤;加入贮存液Ⅱ温育;加入TRIzol,漩涡振荡后离心取上清,加入氯仿,漩涡振荡,室温放置并离心取上清,加入异丙醇,-20℃放置后离心弃上清,加入75%乙醇洗涤沉淀,离心弃上清,风干沉淀,贮存液Ⅲ溶解核酸沉淀,加入DNaseI(RNasefree)和RNase抑制剂,采用RNA纯化试剂盒纯化RNA。简化了微生物总RNA提取步骤,实现了快速、高效的提取厌氧颗粒污泥的微生物总RNA。